此后，后宫形成王皇后、萧淑妃、武昭仪三足鼎立的争宠格局。三人相互猜忌、彼此谗毁、攻讦不断，日日皆有纷争。但此时李治对武则天信任至极，对王、萧二人的谗言全然不信，后宫平衡彻底倾斜。
永徽五年（公元654年），武则天诞下长女，即安定思公主，小公主天资软糯、深得李治喜爱，成为武则天巩固圣宠的重要筹码。而关于安定思公主之死，成为初唐史上最具争议的千古谜案，新旧史料记载截然不同，争议延续千年。
据北宋编撰的《新唐书》与《资治通鉴》详细记载：公主出生满月之际，王皇后念及皇家血脉，亲自前往武则天寝宫探望。皇后心生怜爱，独自逗弄襁褓中的小公主片刻，确认无人照料隐患后，方才转身离去。王皇后离开后，寝宫四下无人，武则天为彻底扳倒皇后、夺取后位，狠心亲手掐死尚且满月的亲生女儿，随后小心翼翼盖好被褥，伪装成公主熟睡的模样，静待李治到来。
片刻后唐高宗驾临，武则天瞬间收起所有冷厉，佯装欢喜，与李治一同掀开被褥探视女儿，随即故作震惊，发现公主已然气绝身亡，当场崩溃痛哭、悲痛欲绝。李治询问侍从缘由，所有宫人皆据实回禀：“皇后方才独自来过此处。”
李治见状勃然大怒，认定是王皇后因妒生恨、残害皇女，怒声怒斥：“皇后杀我爱女！”武则天借机伏地悲泣，细数王皇后往日骄纵善妒、构陷他人的种种过错，句句戳中李治痛点。王皇后百口莫辩、无从辩解，冤屈难伸。经此一事，唐高宗心中彻底埋下废王立武的坚定念头，废黜王皇后、改立武则天为后的心意已然成型。
但此事的真实性始终存疑，时代更早、史料更为严谨的五代《旧唐书》与唐代官修史料《唐会要》，仅极简记载“安定公主暴卒”，只记录了公主突然夭折的结果，无任何弑女、皇后加害的相关记载，并未指向任何凶手，这也让武则天杀女夺后一事，成为史学界争议千年的未解之谜。
此后，李治愈发偏爱、敬重武则天，不满其昭仪位份过低，想要特设宸妃一品尊位，破格册封武则天，使其位份凌驾于四夫人之上，仅次于皇后。但此举严重逾越初唐后宫礼制，触及关陇士族集团利益，当即遭到当朝宰相韩瑗、来济的极力反对。二人援引历朝礼制、据理力争，直言无宸妃之制、不可破格乱礼，最终李治的破格册封之举被迫搁置、未能成行，也让朝堂皇权与士族权臣的对立愈发尖锐。
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